Cy5 NHS Ester是一種廣泛應用于生物分子標記和熒光成像的可見光熒光染料。Cy5（Cyanine5）是一種經(jīng)典的近紅外熒光染料，發(fā)射波長在可見光范圍內(nèi)，尤其適合多重熒光標記和高靈敏度檢測。Cy5 NHS Ester包含一個NHS酯基團，能夠與含有伯胺（-NH?）基團的分子進行共價結(jié)合，形成穩(wěn)定的酰胺鍵。這一特性使其成為蛋白質(zhì)、抗體、核酸以及其他生物分子標記的理想選擇。

2. Cy5 NHS Ester可見光熒光染料：核心特性與成分

2.1 Cy5染料特性

• 發(fā)射波長：Cy5染料的發(fā)射波長通常在650-670 nm之間，具有強烈的紅色熒光，在可見光至近紅外區(qū)域的熒光成像中表現(xiàn)出色，適合用于多重標記和檢測。

2.2 NHS酯基團

• NHS酯基團：Cy5 NHS Ester中的NHS酯（N-羥基琥珀酰亞胺酯）能夠與生物分子中的伯胺反應，形成穩(wěn)定的共價鍵。這一反應通常在溫和的條件下進行，且反應效率高，適合標記蛋白質(zhì)、肽鏈、核酸等。

2.3 高靈敏度與低背景

• 高靈敏度：Cy5的高量子產(chǎn)率確保了在低濃度下也能產(chǎn)生強烈的熒光信號，適合檢測微量生物分子。

• 低背景干擾：Cy5在遠紅區(qū)發(fā)射熒光，減少了生物樣本中的自發(fā)熒光干擾，提供清晰的成像效果。

3. Cy5 NHS Ester可見光熒光染料：主要應用領(lǐng)域

3.1 蛋白質(zhì)和抗體標記

Cy5 NHS Ester廣泛用于蛋白質(zhì)和抗體的標記，通過與蛋白質(zhì)上的伯胺基團共價結(jié)合，生成穩(wěn)定的Cy5標記分子。這一標記方法常用于免疫熒光、流式細胞術(shù)和Western blot等實驗。

3.2 核酸標記

在核酸研究中，Cy5 NHS Ester用于標記DNA或RNA探針，通過標記核酸的末端或內(nèi)部伯胺基團，便于在熒光原位雜交（FISH）和實時PCR等實驗中進行檢測。

3.3 多重熒光成像

Cy5染料的發(fā)射光譜遠離常見的綠色或黃色熒光染料，使其成為多重熒光成像的理想選擇。在復雜的生物樣本中，Cy5可以與其他染料同時使用，實現(xiàn)多重標記和檢測。

4. 使用方法

1. 溶液制備：將1mg Cy5 NHS Ester溶解在適當?shù)臒o水有機溶劑（如DMSO）中，制備標記反應所需的工作溶液。

2. 標記反應：將Cy5 NHS Ester溶液加入到含有伯胺基團的生物分子溶液中，通常在pH 7.5-8.5的緩沖液中反應30分鐘至1小時。溫度控制在室溫或4°C。

3. 去除未反應染料：通過透析、凝膠過濾或其他純化方法去除未反應的Cy5染料，獲得純化的Cy5標記生物分子。

4. 熒光檢測：使用適當?shù)臒晒怙@微鏡或熒光光譜儀檢測Cy5標記的生物分子的熒光信號，并進行數(shù)據(jù)分析。

5. 產(chǎn)品優(yōu)勢

5.1 高效標記能力

Cy5 NHS Ester能夠在溫和條件下高效標記含伯胺基團的生物分子，生成穩(wěn)定的標記物，且標記效率高，適合多種生物分子的熒光標記。

5.2 強烈的熒光信號

Cy5染料在遠紅光區(qū)域發(fā)射強烈的熒光信號，具有高靈敏度，能夠在復雜生物樣本中提供低背景的清晰成像。

5.3 多功能應用

由于其良好的光學性能和廣泛的生物相容性，Cy5 NHS Ester適用于從基礎(chǔ)研究到臨床診斷的多種應用場景，靈活性。

6. 注意事項

• 溶解與保存：Cy5 NHS Ester應溶解在無水DMSO或其他適當?shù)挠袡C溶劑中。未使用的染料應避光、低溫（-20°C）保存，以保持活性。

• 反應條件優(yōu)化：根據(jù)目標生物分子的特性，優(yōu)化反應條件（如pH值、反應時間）以獲得最佳的標記效果。

• 避免水分影響：在標記反應過程中，盡量避免染料與水接觸，以防止NHS酯基團的水解失活。

7. 實驗應用實例

在免疫熒光實驗中，研究人員使用Cy5 NHS Ester標記特異性抗體，通過熒光顯微鏡清晰地觀察到抗體在細胞中的分布。該染料的強熒光信號和低背景干擾使得研究人員能夠精確地定位靶標蛋白，為細胞行為和分子相互作用研究提供了重要的視覺數(shù)據(jù)。

8. 總結(jié)

Cy5 NHS Ester 可見光熒光染料（1mg）是一種高效、可靠的生物分子標記工具，特別適用于蛋白質(zhì)、抗體、核酸等生物分子的熒光標記和檢測。其強烈的遠紅區(qū)熒光發(fā)射、低背景干擾以及良好的生物相容性，使其成為熒光成像、多重標記和分子檢測中的理想選擇。Cy5 NHS Ester為科學研究和臨床應用提供了強大的支持，幫助研究人員在復雜生物體系中實現(xiàn)精確的熒光檢測和成像。