賽默飛超微量分光光度計(jì)（如NanoDrop系列）是一種常用于測量DNA、RNA、蛋白質(zhì)濃度的實(shí)驗(yàn)室儀器。其操作簡單、測量快速、樣品消耗極少，因此廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中。以下是詳細(xì)的使用方法，包括準(zhǔn)備、操作步驟和注意事項(xiàng)。

一、準(zhǔn)備工作

1. 設(shè)備檢查：

• 確保分光光度計(jì)連接電源并打開設(shè)備。

• 檢查設(shè)備是否已正確連接到計(jì)算機(jī)，軟件是否安裝并可正常運(yùn)行（如NanoDrop軟件）。

2. 樣品準(zhǔn)備：

• 確保樣品充分混勻并適當(dāng)稀釋（如果濃度過高可能影響讀數(shù)）。

• 樣品通常為DNA、RNA、蛋白質(zhì)或其他生物分子溶液。

3. 清潔檢測平臺：

• 使用無絨擦拭紙輕輕擦拭測量平臺（光纖）和上臂，確保無灰塵和殘留物，避免影響測量結(jié)果。

4. 選擇適合的模式：

• 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇相應(yīng)的測量模式，如核酸（DNA、RNA）模式、蛋白質(zhì)模式、或其他特殊分析模式。

二、操作步驟

1. 打開NanoDrop軟件

在計(jì)算機(jī)上打開NanoDrop軟件，選擇需要的測量模式（如核酸、蛋白質(zhì)、A280等）。不同模式根據(jù)測量目標(biāo)的不同會有所變化。

2. 校準(zhǔn)設(shè)備（Blank）

每次測量前，使用空白樣品進(jìn)行校準(zhǔn)?？瞻讟悠芬话銥榧兯蚺c樣品相同的緩沖液，校準(zhǔn)步驟如下：

• 將1-2微升的空白液體滴在光纖平臺上。

• 放下上臂，確保液體被夾在上臂和測量平臺之間。

• 點(diǎn)擊軟件中的“Blank"按鈕，設(shè)備將進(jìn)行校準(zhǔn)以消除背景吸光度。

3. 加入樣品

校準(zhǔn)完成后，按照以下步驟進(jìn)行樣品測量：

• 用移液器取1-2微升樣品，準(zhǔn)確滴加到光纖平臺的中心位置。

• 輕輕放下上臂，使樣品處于光纖間的檢測區(qū)域。

• 在軟件中點(diǎn)擊“Measure"按鈕，開始樣品的測量過程。

4. 讀取結(jié)果

• 測量結(jié)果會立即顯示在軟件界面上，包括吸光度（A260、A280）和核酸或蛋白質(zhì)的濃度值。

• 如果是核酸測量，通常會提供A260/A280和A260/A230的比值，用于評估樣品的純度。

5. 清潔平臺

每次測量完成后，都應(yīng)使用無絨擦拭紙輕輕擦拭光纖平臺和上臂，確保樣品殘留被清除，避免交叉污染。

三、數(shù)據(jù)保存與導(dǎo)出

• NanoDrop軟件通常提供了數(shù)據(jù)保存和導(dǎo)出功能。在測量完成后，用戶可以選擇保存數(shù)據(jù)到電腦中，或?qū)С鰹镋xcel或其他格式的文件，便于后續(xù)分析和記錄。

四、注意事項(xiàng)

1. 樣品體積：
   超微量分光光度計(jì)的設(shè)計(jì)允許使用極少量的樣品，通常只需1-2微升。如果樣品體積過少，可能導(dǎo)致檢測不準(zhǔn)確或無法進(jìn)行測量。

2. 樣品純度：
   核酸的A260/A280比值應(yīng)在1.8-2.0之間，如果比值偏離這個范圍，可能表示蛋白質(zhì)或其他雜質(zhì)的污染。

3. 定期校準(zhǔn)：
   建議定期使用標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行校準(zhǔn)，以確保設(shè)備的測量精度。

4. 設(shè)備維護(hù)：
   長期使用后，應(yīng)定期對光纖平臺進(jìn)行清潔，防止樣品殘留物影響讀數(shù)。遵循廠家提供的維護(hù)指南可以延長設(shè)備使用壽命。

5. 樣品稀釋：
   高濃度樣品可能超出儀器的線性檢測范圍，影響結(jié)果準(zhǔn)確性。必要時，建議先稀釋樣品再進(jìn)行測量。

五、常見問題與解決

1. 讀數(shù)異常：

• 樣品可能含有氣泡或未充分混勻。

• 平臺上殘留有之前的樣品。

• 樣品濃度過高，需稀釋后再測。

2. 低純度比值（A260/A280或A260/A230）：

• 樣品中可能含有蛋白質(zhì)、酚類或其他污染物。需進(jìn)一步純化樣品。

• 使用錯誤的空白液體進(jìn)行校準(zhǔn)，需確保空白液體與樣品溶劑一致。

3. 平臺殘留液體：

• 每次測量后應(yīng)立即清潔平臺，避免樣品干燥在平臺上。

• 如果有殘留難以清除，可以使用70%乙醇或去離子水濕潤擦拭紙進(jìn)行清潔。

六、總結(jié)

賽默飛超微量分光光度計(jì)是實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行生物分子濃度測定的強(qiáng)大工具，使用簡單、快速且節(jié)省樣品。在日常操作中，注意樣品的準(zhǔn)備、平臺清潔和設(shè)備校準(zhǔn)，可以確保獲得準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。